Дисбиотические нарушения микробиоценоза слизистых оболочек ротоглотки и их роль в этиопатогенезе инфекционного мононуклеоза

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

Дисбиотические нарушения микробиоценоза слизистых оболочек ротоглотки и их роль в этиопатогенезе инфекционного мононуклеоза

П.С.Адеишвили1, О.В.Шамшева2, И.В.Полеско3,  Осипов Г.А. 4

1Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова,

кафедра инфекционных болезней у детей № 1 педиатрического факультета, Москва

(зав. кафедрой – акад. РАМН, проф. В.Ф.Учайкин);

2Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова,

кафедра инфекционных болезней у детей № 2 педиатрического факультета, Москва

(зав. кафедрой – проф. О.В.Шамшева);

3Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова,

кафедра кожных болезней и косметологии факультета усовершенствования врачей, Москва

(зав. кафедрой – проф. Н.Н.Потекаев)

4 Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В.Склифосовского

Методом масс-спектрометрии микробных маркеров изучен микробный пейзаж ротоглотки у 22 детей с инфекционным мононуклеозом в возрасте от 3 до 14 лет. Группу сравнения составили 10 детей без клинических признаков инфекционного мононуклеоза, а также острой респираторной вирусной инфекции, включая гиперемию слизистой ротоглотки и миндалин. Полученные данные позволили верифицировать и количественно определить состав микробного сообщества в ротоглотке при инфекционном мононуклеозе и рассматривать ангину при инфекционном мононуклеозе как заболевание, обусловленное ассоциацией различных условно-патогенных микроорганизмов, концентрация которых превышает численность микробов у здоровых детей минимум на 2 порядка.

Ключевые слова: инфекционный мононуклеоз, микробиоценоз, масс-спектрометрия, микробные маркеры, слизистые оболочки ротоготки

 

Disbiotic Disturbance of Biocenosis in Oropharynx and its Role in Etiopathogenesis of Infectious Mononucleosis

P.S. Adeishvili1, O.V. Shamsheva2, I.V. Polesko3

Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov, Moscow

Microbial spectrum of the oropharynx (56 taxons) was studied in 22 children diagnoses with infectious mononucleosis (IM) aged from 3 to 14 years old and in 10 children without clinical signs of acute respiratory viral infectious (SARS) and mucosal hyperemia and tonsil. The method of mass spectrometry of microbal markers (MSMM) was applied. The data obtained allowed to verify and quantify the composition of the microbial community in the oropharynx in children with IM. These data revealed excessive growth (infection) in oropharynx. The number of bacteria 21 taxons exessed the nirmal values more than twice. We tend to interpret it as decopensated disbiosis.

Key words: infectious mononucleosis, tonsillitis, microbial spectrum of the oropharynx.

Для корреспонденции:

Шамшева Ольга Васильевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой инфекционных болезней у детей № 2 педиатрического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И.Пирогова

Адрес: 117049, Москва, 4-й Добрынинский пер., 1

Телефон: (499) 236-0155

E-mail: ch-infection@mail.ru

Статья поступила 20.03.2013, принята к печати ХХХ

Инфекционный мононуклеоз – полиэтиологическое заболевание, вызываемое вирусом Эпшейна–Барр, цитомегаловирусом, вирусом герпеса 6 типа. Доказано, что клиническая картина болезни мало зависит от этиологии мононуклеоза [1]. В тоже время появились данные о зависимости клинической картины заболевания от места проникновения инфекционного фактора [2]. При парентеральном инфицировании возникает висцеральный синдром в виде герпетического гепатита или другой висцеральной патологии. При проникновении инфекции воздушно-капельным путем реализуется типичный для инфекционного мононуклеоза синдромокомплекс, включающий в себя лихорадку, ангину, полиадению, увеличение печени и селезенки, появление атипичных мононуклеаров в периферической крови. Такие представления многое объясняют в клинике заболевания, тем не менее по-прежнему остаются дискутабельными некоторые вопросы, в том числе этиология и патогенез ангины. Одни исследователи считают, что в механизме возникновения экссудативного выпота при инфекционном мононуклеозе ведущее значение принадлежит бактериальной инфекции, другие – стрепто-стафилококковой и грибковой флоре [3], третьи – вирусам [4, 5] или сочетанию вирусов и бактерий [5, 6]. Противоречивые представления об этиопатогенезе ангины при инфекционном мононуклеозе нашли отражение в рекомендованных схемах лечения – от обязательного назначения антибактерильных средств [7, 8] до полного их исключения [9]. Однако применяемые на сегодняшний день в клинической практике методы диагностики имеют определенные ограничения и недостатки. Так, при классическом бактериологическом исследовании не представляется возможным оценить роль некультивируемых микроорганизмов в инфекционном процессе. Трудности в диагностике хронических и латентных инфекций могут возникать и при использовании молекулярно-биологических методов, при которых частота ложноположительных результатов и невозможность адекватной количественной оценки резко возрастает [10]. Соответственно для реализации задачи требуется подключение специализированных лабораторий с арсеналом культуральных и некультуральных методов, позволяющих обеспечить количественный анализ полимикробной инфекции в каждом конкретном случае. Таким методом можно считать метод масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ) [13], позволяющий в ускоренном режиме, минуя стадию культивирования и тестовых ферментаций, определить спектр доминирующих микроорганизмов (более 104 клеток в пробе) по молекулярным маркерам – клеточным высшим жирным кислотам, альдегидам и стеринам. Внедрение МСММ позволяет сократить время и стоимость исследования, минуя стадии повторных пересевов первичных колоний и тестовых ферментаций, которые особенно сложны, трудоемки и длительны для анаэробов. Используемый в методе математический аппарат количественного реконструирования микроорганизмов в очаге воспаления по составу их маркеров в биопробе позволяет контролировать инфекцию в динамике заболевания, а также эффективность лечения.

В связи с вышеизложенным целью  исследования стало изучение роли бактериальной инфекции  в поражении ротоглотки  у детей с инфекционным мононуклеозом.

Пациенты и методы

Под нашим наблюдением находились 22 ребенка с диагнозом инфекционный мононуклеоз в возрасте от 3 до 14 лет. Группу сравнения составили 10 детей без клинических признаков инфекционного мононуклеоза, а также острой респираторной вирусной инфекции (включая гиперемию слизистой ротоглотки и миндалин), которые находились на лечении в офтальмологическом отделении Морозовской детской городской клинической больницы г. Москвы с диагнозами: миопия, травма глаза, увеит, помутнение роговицы, перелом орбиты. В период разгара заболевания всем пациентам проводили забор пробы с миндалин бактериологическими тампонами, которые хранили в замороженном состоянии (при -5 оС). У всех детей с инфекционным мононуклеозом состояние было средней тяжести с типичными клиническими проявлениями: лихорадка, наложения на миндалинах, болезненность при глотании, увеличение размеров лимфатических узлов, гепатоспленомегалия, количественные и качественные изменения мононуклеаров, положительный ЛА-ИМ-тест. У 19 детей (86,4%) начало заболевания было острым, у остальных (13,6%) – отмечалось постепенное нарастание симптомов интоксикации.

Результаты исследования и их обсуждение

Используя МСММ, оказалось возможным установить в ротоглотке наличие микроорганизмов, принадлежащих к 56 таксону (таблица).

Результаты сравнительного анализа микробного сообщества в смывах с миндалин у детей с инфекционным мононуклеозом (n = 22) показали систематическое клинически значимое увеличение численности бактерий 21 таксона, по сравнению с детьми без поражения ротоглотки (n = 10). К ним относились следующие виды микроорганизмов: Moraxella, Fusobacterium, Streptococcus (оральные и анаэробные S. mutans), Prevotella, Propionibacterium (P. acnes, P. jensenii, P. freudenreichii), Eubacterium/Clostridium, актинобактерий Streptomyces, Actinomyces Bacteroides fragilis, Peptostreptococcus anaerobius, вирусы Эпштейна-Барр и другие микроорганизмы.

Наибольшая кратность увеличения концентрации маркеров микроорганизмов в мазке у детей с инфекционным мононуклеозом (на два порядка и более выше концентрации маркеров в группе сравнения) отмечена для фузобактерий, бактероидов, стрептомицетов, анаэробного пептострептококка. До 30 раз увеличилась численность моракселл и пропионобактерий, на порядок возросла численность бактерий группы Eubacterium/Clostridium, а также стрептококков, нокардий, превотел, актиномицетов. Концентрация маркеров других микроорганизмов не превышала в среднем уровень колонизации слизистой зева у детей группы сравнения. К ним относились представители родов Staphylococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus, часть клостридий, Pseudonocardia. Микроскопические грибы (не кандида) – плесневые, дерматофиты и другие оказались в дефиците у детей с инфекционным мононуклеозом, по сравнению с детьми контрольной группы.

Таким образом, результаты наших исследований, полученные МСММ, позволили выявить полимикробную инфекцию ротоглотки у детей с инфекционным мононуклеозом за счет более чем двукратного превышения нормальных значений численности бактерий 21 таксона, что мы склонны трактовать как декомпенсированный дисбиоз. При этом мы не выявили превалирующую роль какого-либо одного конкретного бактериального патогена. Можно предположить, что в патогенезе ангины при инфекционном мононуклеозе значимую роль играет совокупность многих условно-патогенных представителей микрофлоры, действующих в условиях вирусного поражения лимфоидных образований ротоглотки. По-видимому, синдром инфекционного мононуклеоза возникает при попадании вируса семейства герпес (вирус Эпштейна–Барр, цитомегаловирус, герпес 6 типа) в лимфоидные образования рото-носоглотки (тропный орган) в результате чего запускается лимфопролиферативная линия патогенеза, снижается защитная роль мукозального иммунитета, активизируются колонисты небных миндалин, вследствие чего возникает дисбиоз.

Выводы

Ангина при инфекционном мононуклеозе имеет вирусно-бактериальную природу.

Дисбиоз, возникающий при ангине при инфекционном мононуклеозе, обусловлен повышенной концентрацией более чем двукратного превышения нормальных значений численности бактерий 21 таксона.

Список литературы:

Новосад Е.В. Инфекционный мононуклеоз, ассоциированный с вирусом герпеса человека 6 типа, у детей: Автореф. дис. … канд. мед. наук. М., 2010. 24 с.

Учайкин В.Ф. Эволюция патогенеза инфекционных болезней // Дет. инфек. 2012. Т.11. №4. С.4–8.

Белова Е.Г. Клинико-лабораторная характеристика, состояние ротоглотки и факторов местного иммунитета у больных Эпштейна–Барр вирусным инфекционным мононуклеозом: Автореф. дис. … канд. мед. наук. М., 2000. 24 с.

Квиташвили А.А. Вопросы клиники и патогенеза инфекционного мононуклеоза (болезни Филатова): Автореф. дис. … докт. мед. наук. Тбилиси, 1975. 48 с.

Чирешкина Н.М. Инфекционный мононуклеоз у детей. М.: Медицина, 1973. 172 с.

Нисевич Н.И., Казарин В.С., Гаспарян М.О. Инфекционный мононуклеоз у детей. М.: Медицина, 1975. 176 с.

Учайкин В.Ф. Руководство по инфекционным болезням у детей. М.: Гэотар Медицина, 1998. С. 252–274.

Fota-Markowska H., Rolla-Szcxepanska R., Chudnicka A. et al. Candidosis oft the pharyngeal mucosa in patients with infectious mononucleosis // Ann Univ Mariae Curie Sklodowska Med. 2004. V.59. №1. P.200-203.

Пахроменко В.П. Инфекционный мононуклеоз у детей (фазовая динамика клинической картины, показателей обменных процессов, лечебных мероприятий, особенности ранней диагностики и диспансеризации): Автореф. дис. … докт. мед. наук. Смоленск, 2006. 45 с.

Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учеб. пособие / Под. ред. А.А.Воробьева. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. 691 с.

Поздеев О.К. Медицинская микробиология: Учеб. пособие / Под ред. В.И.Покровского. 4-е изд., испр. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. 768 с.

Михайлова Д.О., Бобылева З.Д., Базарный В.В., Амон Е.П. и др. Диагностическое значение различных иммунологических методов лабораторной диагностики легионеллеза // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. 2008. №2. С.51–53.

Годков М.А., Осипов Г.А., Федосова Н.Ф., Лядов К.В. Возможности масс-спектрометрии микробных маркеров в лабораторном мониторинге дисбиозов и инфекций. Справочник заведующего КДЛ. 2011, № 7, С. 35-44.

Информация об авторах:

Адеишвили Пикрия Соломоновна, ассистент кафедры инфекционных болезней у детей № 2 педиатрического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И.Пирогова

Адрес: 119049, Москва, 4-й Добрынинский пер., 1

Телефон: (499) 236- 2551

E-mail: ch-infection@mail.ru

Шамшева Ольга Васильевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая  кафедрой инфекционных болезней у детей №2 педиатрического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И.Пирогова

Адрес: 119049, Москва, 4-й Добрынинский пер., 1

Телефон: (499) 236- 2551

E-mail: ch-infection@mail.ru

Полеско Ирина Васильевна, доктор медицинских наук, профессор кафедры кожных болезней и косметологии факультета усовершенствования врачей Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И.Пирогова

Адрес: 117556, Москва, Варшавское ш., 85, к.1

Телефон:  8(495) 616-2959

E-mail: polesko@list.ru

Осипов Георгий Андреевич доктор биологических наук, профессор микробиологии, старший научный сотрудник Научно-исследовательского института скорой помощи им. Н.В.Склифосовского

Адрес: 109202, Москва, 3-я Карачаровская ул, 4, корпус 2, кв. 1

Телефон:  8(903) 558-3126

E-mail: osipovga@mail.ru

Комментировать