Шахова О.Б., Дамиров М.М., Саттарова З.И., Осипов Г.А., Солонин С.А.

Использование масс-спектрометрии для определения маркеров микроорганизмов у больных, оперированных по поводу неразвивающейся беременности

РОССИЙСКИЙ КОНГРЕСС ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ 2015

В последние годы в структуре репродуктивных потерь растет доля неразвивающейся беременности (НБ). По мнению ряда авторов она составляет 45-80% случаев невынашивания беременности в I триместре (Макаров О.В., 2009, Радзинский В.Е., 2015, Cohen M., 2007,2011). Согласно резолюции XVIII конгресса FIGO, международной федерации акушеров гинекологов (2006), НБ в 100% наблюдений сочетается с хроническим эндометритом, независимо от основной причины остановки гестации. При этом назначение антибактериальных препаратов целесообразно только при наличии выявленного инфекционного агента (Радзинский В.Е., 2015). Это является основанием для непрерывного поиска достоверных и быстрых лабораторных методов выявления инфекционного компонента НБ. Одним из наиболее перспективных направлений представляется определение специфических маркеров – структурных компонентов микроорганизмов в биологических жидкостях организма человека, и использование их для идентификации микроорганизмов с помощью метода масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ). Данный метод позволяет определить качественный и количественный состав микробиоценозов по жирным кислотам, оксикислотам, альдегидам и стеринам мембран клеток микроорганизмов и их профилям, поскольку состав жирных кислот детерминирован ДНК и в целом остается постоянным для определенного вида.

Цель исследования: выявление и определение в операционном материале численности анаэробов и других редко культивируемых микроорганизмов для оценки инфекционной составляющей НБ.

Для достижения поставленной цели исследовали операционный материал 23 пациенток, оперированных по поводу НБ в сроке от 5 до 12 недель. В анамнезе 17 пациенток были беременности, у 9 пациенток – роды. У 8 пациенток отмечены самопроизвольные выкидыши маточной беременности малого срока, у 7 пациенток – неразвивающиеся беременности в сроке от 5 до 11 недель гестации. Состав микробного сообщества исследовали методом МСММ. Пробы (операционный материал) подвергали кислому метанолизу для высвобождения маркерных веществ (высших жирных кислот, жирных альдегидов, стеринов) с последующей экстракцией и обработкой N,О-бис-

(триметилсилил)-трифторацетамидом для получения триметилсилильных эфиров гидрокси-кислот. Извлеченные молекулярные маркеры разделялись методом газовой хроматографии с последующим масс-спектрометрическим детектированием с помощью анализатора НР-5880/5975 Agillent Technologies (США) в модификации «Микробиологический анализатор «МАЭСТРО» ООО Интерлаб (Россия). Для количественной оценки использовался внутренний стандарт – дейтерометиловый эфир тридекановый кислоты. Результаты МСММ исследования операционного материала сравнивали с уровнем маркеров микроорганизмов в крови.

Установлено, что у большинства обследованных пациенток уровни микробных маркеров Clostridium ramosum, Eubacterium lentum, Pseudomonas aeruginosa, Helicobacter pylory, Streptococcus mutans, Nocardia asteroides Acinetobacter, Staphylococcus, Haemophylus/Burkholderia, выделенных из операционного материала, превышали их уровни в крови. Возможно, это обусловлено преимущественным размножением данных микроорганизмов в эндометрии, что делает их наиболее вероятным этиологическим фактором эндометрита.

В протестированном операционном материале выявлено доминирование маркеров бактерий кишечной группы: Clostridium ramosum, Eubacterium/Cl.coccoides и Propionibacterium/Cl.subterminale. Численность Eubacterium lentum, Streptococcus mutans, Nocardia asteroides, видов Staphylococcus, Ruminicoccus, Streptomyces, Alcaligenes, пересчитанная по технологии МСММ, достигала 109 – 1010 клеток/мл и существенно превышала расчетный клинически значимый уровень. При этом более чем двукратное превышение расчетной численности микроорганизмов в операционном материале по сравнению с исследованиями крови отмечено для Eubacterium lentum (22 пациентки – 95,7%), Eubacterium/Cl.coccoides (20 пациенток – 87%), Propionibacterium/Cl.subterminale (19 пациенток – 82,6%), Streptococcus mutans (19 пациенток – 82,6%), Staphylococcus (17 пациенток – 73,9%).

Таким образом, метод МСММ операционного материала позволяет провести реконструкцию микробного сообщества, определить состав микст-инфекции и рассчитать численность микроорганизмов в полости матки при НБ. Полученные данные подтвердили полимикробный характер воспалительного процесса в полости матки при данной патологии. Выявленные изменения целесообразно использовать при выборе антибактериальной терапии.